"Tesis de Doctorado de la Facultad de Farmacia y Bioquimica - UBA".

CARACTERIZACION DE LOS ANTIGENOS MICOBACTERIANOS ESTIMULANTES DE LA RESPUESTA INMUNE CELULAR

Autor: Alicia Elsa ALITO

Director: Dr. Angel CATALDI

Consejero de Estudios y Supervisor: Ramón de TORRES

Area de investigación: Inmunología

Lugar de trabajo: Lab. de Tuberculosis - Inst. de Biotecnología - INTA Castelar

Resumen

La respuesta inmune protectiva contra la tuberculosis bovina (TBC) es mediada por linfocitos T. El objetivo de esta tesis fue caracterizar proteínas antigénicas que estimularan esta población.

La metodología fue: fraccionar proteínas de M. bovis por columnas de intercambio aniónico / electroelución. Evaluar su antigenicidad en bovinos experimentalmente infectados. Seleccionar las fracciones más estimulantes. Separarlas por geles de PAGE-SDS y por dos dimensiones. Identificarlas mediante secuencia N- terminal y espectrometría de masas.

Las fracciones del filtrado del cultivo con altos índices de estimulación contenían las proteínas: 85B, MPB70, MPT51, ESAT-6, CFP10, TPX, Rv2624c y TrbB. La del extracto celular contenía las proteínas Rv3447 y L7/L12. Los genes de las proteínas: Rv2624c, TPX, TrbB y L7//L12 se clonaron en vectores de expresión bacterianos y las proteínas recombinantes obtenidas en E. coli fueron purificadas y evaluada su antigenicidad en bovinos experimentalmente infectados.

Las proteínas Rv2624c, TrbB, TPX, CFP10, ESAT-6 carecen de péptido señal. ESAT-6 y CFP10 son potentes antígenos T. TrbB y TPX estimulan la liberación de gamma interferón en una etapa más tardía. La proteína Rv2624c es la menos estimulante. Aparece tardíamente y no persiste en el tiempo. En ensayos de DTH, Rv2624c induce un a mejor reacción de hipersensibilidad tardía. Le siguen TPX y L7/L12. No se detectan anticuerpos en las tuberculosis recién adquiridas pero en los casos de tuberculosis crónica, los anticuerpos son detectados por PPD y por los antígenos recombinantes.

Estos resultados serían útiles para optimizar los métodos de diagnóstico y para el desarrollo de nuevas vacunas.

EFECTOS DEL CADMIO SOBRE LA SIMBIOSIS RHIZOBIUM-LEGUMINOSA

Autor: Karina Beatriz BALESTRASSE

Director: María Luján TOMARO

Area de investigación: Química Biológica

Lugar de trabajo: Cátedra de Química Biológica Vegetal - F. F. y B.

Resumen

La soja es un importante cultivo en el mundo, ya que ofrece proteína de alta calidad, aumentando el consumo del nitrógeno combinado presente en el suelo. Sin embargo, su rendimiento puede ser adversamente afectado por diferentes estreses ambientales. Uno de los principales estreses abióticos que afectan la productividad de las plantas, es el exceso de metales pesados presentes en los suelos como resultado de la actividad urbana e industrial. El cadmio es uno de los mayores polutantes ambientales produciendo fitotoxicidad aún a bajas dosis. Por lo tanto, el objetivo de esta Tesis fue estudiar el metabolismo del nitrógeno y la respuesta del sistema de defensa antioxidante en nódulos y raíces de plantas de soja sometidas a diferente concentraciones de CdCl 2 . Los resultados obtenidos demuestran claramente que el tratamiento con cadmio causa una marcada perturbación en el metabolismo del nitrógeno ya que la fijación del nitrógeno y la asimilación primaria de amonio se encontraron significativamente disminuidas. Respecto del comportamiento frente a la generación de estrés oxidativo, bajas concentraciones de cadmio inducen una respuesta antioxidante tanto en nódulos como en raíces mientras que altas concentraciones del metal inducen daño oxidativo. Además, los resultados obtenidos sugieren que, en general, luego del tratamiento con cadmio la asimilación y metabolismo del nitrógeno y la respuesta frente a una situación de estrés oxidativo fueron más afectadas en las raíces que en los nódulos de plantas de soja.

ESTUDIO DE LOS FACTORES HUMORALES Y CELULARES RESPONSABLES DE LA SOBREVIDA FETAL

Autor: Sandra Maria BLOIS

Director: Prof. Dr. Ricardo A. MARGNI

Area de Investigación: Inmunología

Lugar de trabajo: Cátedra de Inmunología - IDEHU (CONICET - UBA) - F. F. y B.

Resumen

Las células dendríticas (CD) son centinelas inmunes importantes en la inducción, mantenimiento y regulación de la respuesta inmune. Estudios recientes, describen la presencia de CD en la interfase materno fetal en la decidua humana. Sin embargo, existe información limitada acerca del fenotipo y función, así como también del efecto de la inoculación de CD en el modelo murino CBA/J x DBA/2J.

En este trabajo de tesis se demostró que luego de la inoculación de CD singeneicas cargadas o no con proteínas paternas, el porcentaje de resorción fetal disminuyó; pero la protección depende del tiempo entre la inoculación y el inicio de la gestación.

Si bien se demostró que la cinética de anticuerpos asimétricos (AAc) fue modificada, no se encontró correlación entre la alta producción de AAc y el bajo índice de resorción fetal.

La caracterización de CD en útero y sangre periférica reveló una variación en su fenotipo durante la gestación. Las mismas presentaron mayor producción de IL-10 que de IL-12 y la mayoría de las CD pertenecen al linaje mieloide. La expresión de MHC II en CD demostró una disminución entre los días 5.5 y 8.5 de la gestación.

Estos hallazgos sugieren que las CD presentes en la interfase materno fetal son un tipo celular con especial actividad regulatoria con implicancia en el mantenimiento de la gestación .

 

 

OCITOCINA, SISTEMA COLINERGICO Y MEMORIA.

Autor: Mariano BOCCIA

Director: Dr. Carlos BARATTI

Area de Investigación: Farmacología

Lugar de trabajo: Cátedra de Farmacología - F. F. y B.

Resumen

La administración de ocitocina (OT, 0.01-0.10 ng, icv) a ratones Swiss macho inmediatamente post-entrenamiento, daña la retención en una tarea de evitamiento inhibitorio. Por el contrario, la administración post-entrenamiento de un antagonista para el receptor de ocitocina, AOT (0.02-0.20 ng, icv) facilito significativamente el desempeño durante el test. Ni la OT, ni el AOT afectaron las latencias de retención en aquellos ratones a los cuales no se les administró el shock eléctrico durante el entrenamiento. Los efectos de la OT y del AOT fueron tiempo-dependientes, sugiriendo que ambos estarían actuando sobre los procesos de consolidación de la memoria. Los efectos de la OT (0.10 ng, icv) sobre la retención fueron prevenidos por el AOT (0.02 ng, icv). Los efectos de la OT (0.10 ng, icv) sobre el desempeño en la tarea conductual fueron revertidos por el anticolinesterásico fisostigmina (35-150 µg/kg, ip) y por la linopirdina, un facilitador de la liberación de acetilcolina. La facilitación de la retención inducida por el AOT fue prevenida por dosis sub-efectivas de atropina (0.5 mg/kg, ip) y mecamilamina (5.0 mg/kg, ip), pero no por la metilatropina (0.5 mg/kg, ip) o el hexametonio (5.0 mg/kg, ip). Se sugiere que la ocitocina estaría modulando negativamente, a nivel central, la actividad del sistema colinérgico durante el período post-entrenamiento luego de la adquisición de una respuesta de evitamiento inhibitorio, lo que conlleva a un deterioro en las latencias de retención.

 

 

INHIBINAS: NUEVOS MARCADORES DE LA FUNCION GONADAL

Autor: Stella Maris CAMPO

Director: Dr. César BERGADA

Codirector: Dr. Ricardo CALANDRA

Consejero de Estudios y Supervisor de Tesis: Dra. Ana María BLANCO

Lugar de trabajo: Centro de Investigaciones Endocrinológicas dependiente del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas - Hospital de Niños "R. Gutierrez"

Resumen

Las inhibinas producidas en las gonadas regulan la secreción de la FSH. El desarrollo de nuevas metodologías específicas para la determinación de formas moleculares bioactivas ha abierto la posibilidad de estudiar nuevos aspectos de la función gonadal, particularmente el compartimiento tubular del testículo. El presente trabajo de Tesis tuvo como objetivo la determinación de perfiles circulantes de las diferentes formas moleculares de inhibina en niños y niñas normales, desde el nacimiento hasta la finalización del desarrollo puberal, estableciendo posibles relaciones con las gonadotrofinas y esteroides sexuales. Con el propósito de optimizar la interpretación de estos resultados y esclarecer los mecanismos que regulan la producción de las inhibinas en las células gonadales en ambos sexos, se utilizaron dos modelos experimentales: a) cultivo de células de la granulosa de ratas tratadas con DES y b) inducción de daño del epitelio germinal en ratas macho adultas portadoras de OEA. Por último, se evaluó la posible utilidad clínica de la determinación de las distintas inhibinas en el estudio de la Infertilidad Masculina.

Los resultados obtenidos en esta Tesis contribuyen a esclarecer aspectos de la función gonadal, particularmente en la infancia y durante el desarrollo puberal, así como también al desarrollo de nuevos modelos experimentales que permitan dilucidar la etiopatogenia de ciertas disfunciones gonadales que puedan comprometer la capacidad reproductiva.

 

MECANISMOS DE PATOGENICIDAD Y PERFIL METABOLICO DE CEPAS DE C lostridium chauvoei , DE ORIGEN BOVINO

Autor: Graciela Herminia CARLONI

Director: Dr. Ramón de TORRES

Area de investigación: Microbiología

Lugar de trabajo: Cátedra de Microbiología - Fac. Cs. Veterinarias y

Cátedra de Microbiología - F. F. y B.

Resumen

Clostridium chauvoei es el agente del carbunclo sintomático, de gran importancia en animales en producción.

Se recopilaron cepas de C.chauvoei provenientes de aislamientos clínicos y de colecciones oficiales y privadas para realizar la cerfificación de especie mediante su caracterización morfológica, bioquímica y molecular.

Se determinó la virulencia de las cepas por inoculación en animales de laboratorio, la actividad de algunas fracciones tóxicas in vitro, como DNasa y complejo hemolítico y, el perfil de sensibilidad antimicrobianos. Se buscaron estructuras extracromosómicas y su eventual participación en la codificación de algunos de los factores mencionados.

Se certificaron 13 cepas como C.chauvoei , acompañando este conjunto con una base de datos. Se detectó un gradiente de virulencia entre las mismas, actividad de DNasa en 11 y el complejo hemolítico, en 12 cepas. No se encontró resistencia a antimicrobianos. Con una metodología específica para concentrar DNA, se encontraron bandas indicativas de posible presencia de plásmidos en 2 de las cepas estudiadas, pero sin poder relacionarlos con la producción de alguno de los factores analizados y demostrando que la virulencia del microroganismo es dependiente de la elaboración de complejos enzimáticos y también, de su relación con el huésped donde reside.

Se normatizó una metodología de trabajo para bacterias del género Clostridium adecuada a desarrollarse en laboratorios del país y del resto de Latinoamérica, vinculable y complementaria de las ya existentes.

 

 

REGULACION DE LA DISPONIBILIDAD DE L-DOPA TISULAR POR INSULINA

Autor: María Andrea CARRANZA

Director: Dra. Susana NOWICKI

Consejero de Estudios y Supervisor: Dr. Carlos TAIRA

Area de investigación: Biología Celular

Lugar de trabajo: Centro de Investigaciones Endocrinológicas (CEDIE) - CONICET del Hospital de Niños "Ricardo Gutierrez".

Resumen

En varios tejidos se ha descripto un efecto estimulatorio de la insulina sobre la captación de aminoácidos neutros. En esta trabajo de Tesis se examina el efecto de la insulina sobre la captación de L-DOPA por células aisladas de túbulo proximal. La insulina (200 mU/ml) aumentó aproximadamente un 50 % la captación de L-DOPA en células tubulares aisladas mediante un aumento del 41 % en el número de los sitios de transporte de alta afinidad (L-DOPA 0.2 mM), (L-dopa 0.2mM) (0.60±0.05 vs 0.82±0.09 pmol L-dopa/mg protein/min), sin cambios en la afinidad del transportador. El efecto de la insulina es independiente de la actividad de la Na,K-ATPasa o del sistema de microtúbulos, pero requiere la integridad del citoesqueleto de actina. El transporte de L-DOPA por los sitios de baja afinidad (L-DOPA 5 mM) no fue afectado.

El efecto de la insulina depende de la actividad de la tirosina kinasa, de la tirosina fosfatasa, de la fosfatidilinositol-3-kinasa y de la proteína kinasa C.

El efecto de la insulina no se observa en células aisladas de ratas diabéticas o insulino resistentes (IR). La reabsorción renal de L-DOPA in vivo también es menor en ratas insulino dependientes.

Se concluye que la insulina aumenta la captación de L-DOPA en células tubulares aisladas de ratas controles, pero no de ratas diabéticas o insulino resistentes (IR). Una alteración en la reabsorción de L-DOPA in vivo también se manifiesta en el modelo de resistencia a la insulina.

 

 

ESTUDIO COMPARATIVO DE LA INMUNOGENICIDAD DE PROTEINAS RECOMBINANTES Y PLASMIDOS CODIFICANTES PARA PROTEINAS DE BRUCELLA

Autor: Juliana CASSATARO

Director: Dr. Guillermo GIAMBARTOLOMEI

Area de investigación: Inmunología

Lugar de trabajo: IDEHU - Cátedra de Inmunología - F. F. y B.

Resumen

Se desarrolló un sistema de vacunación a ADN codificante para la lumazina sintetasa (BLS), que indujo respuesta humoral y celular Th1 específica contra BLS. Esta respuesta indujo protección parcial frente al desafío con B. abortus y B. ovis. Por otro lado la inmunización con el factor liberador del ribosoma (CP24) recombinante o como vacuna a ADN fueron capaces de inducir la producción de IFN- g , pero no indujeron protección frente al desafío con B. melitensis. Demostramos que la vacunación con ADN codificante para Omp31 (pCIOmp31) no indujo buena respuesta humoral ni celular Th, mientras que la inmunización con Omp31r indujo una respuesta humoral específica y celular Th1. Ambas inmunizaciones indujeron protección contra B. ovis y B. melitensis . Nuestros estudios demostraron que las respuestas citotóxicas tienen un rol protector frente a la infección por este patógeno . Comprobamos que la inmunización heteróloga pCIOmp31 y restimulación con Omp31r mejoró la respuesta Th1 y la protección contra B. ovis y B. melitensis. La inoculación mixta de BLS y Omp31 como vacunas a ADN no confirió mayor protección que la inmunización de los plásmidos individuales. Por el contrario, la inmunización de una quimera que comprende la secuencia completa de BLS y 27aa de Omp31 confirió protección total contra B. ovis.

EXPRESION Y MODULACION DE RECEPTORES b -ADRENERGICOS EN LINFOCITOS T HIPERPROLIFERATIVOS

Autor: Claudia CAZAUX

Director: Dra. Graciela CREMASCHI

Consejero de Estudios y Supervisor: Dr. Modesto RUBIO

Area de investigación: Inmunología

Lugar de trabajo: Lab. de la División Inmunofarmacología del Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos (CEFYBO) - CONICET

Resumen

Se estudió comparativamente la expresión y funcionalidad de receptores ß-adrenérgicos ( b -ARs) en linfocitos T murinos normales y tumorales para analizar su participación en los mecanismos de control neuroinmune de la proliferación linfocitaria.

Células modificadas, S 49 m, derivadas del linfoma T S 49 , mostraron una expresión reducida de b -ARs, funcionalmente desacoplados del sistema adenilato ciclasa (a.c.) y ausencia de expresión superficial de antígenos de histocompatibilidad clase I, molecularmente asociados a dichos receptores. Esto fue acompañado de una mayor velocidad de crecimiento respecto a la línea original. El linfoma T, BW5147, presentó también un número reducido de b -ARs no funcionales, pero acoplados a la activación de proteína quinasa C (PKC). Inhibidores de los caminos intracelulares involucrados en la proliferación linfocitaria condujeron a la recuperación de b -ARs.

El estímulo mitogénico de linfocitos T normales llevó a una disminución de b -ARs durante el pico de respuesta proliferativa, funcionalmente acoplados al sistema a.c., aunque con menor respuesta a los agonistas específicos. Nuevamente se comprobó la participación de los caminos enzimáticos intracelulares en la regulación negativa de los b -ARs.

Estos resultados demuestran el control ejercido por el sistema simpático ß-adrenérgico a nivel linfocitario y marcan su papel diferencial en el control de la proliferación linfocitaria normal y tumoral.

 

 

REGULACION DE LA ACTIVIDAD TIROSINA - QUINASA DEL RECEPTOR DE INSULINA POR FOSFORILACION EN RESIDUOS SERINA Y TREONINA

Autor: Marcelo COBA

Director: Daniel TURYN

Area de investigación: Química Biológica

Lugar de trabajo: Inst. de Química y Fisicoquímica Biológicas (IQUIFIB) - F. F. y B.

Resumen

El receptor de insulina pertenece a la familia de las proteínas tirosina quinasa. La unión de la hormona provoca la activación y autofosforilación en tirosina del receptor. Este rápido aumento de la fosforilación en tirosina es seguido por un incrmento de la fosforilación en serinas y troninas. Aunque el aumento de la fosforilación en serinas y treoninas del IR estaría implicado en la inhibición de la actividad quinasa del receptor, el real significado y los sitios de estas fosforilaciones se desconocen.

Se ha propuesto que el residuo serina 994 del IR estaría ubicado en un loop inhibidor de la actividad del IR.

Para determinar si la fosforilación del residuo serina 994 está implicada en la regulación de la actividad del IR, se obtuvieron anticuerpos específicos que reconocieron al IR fosforilado en la serina 994. El patrón de fosforilación se determinó en distintos modelos de resistencia a la insulina: el modelo de ratas obesas Zucker, que presentó disminuida la actividad tirosina quinasa del IR; y el modelo de ratones transgénicos que sobre expresan la hormona de crecimiento bovina (PEPCK-bGH), los cuales presentaron una actividad tirosina quinasa superior a los ratones normales. En estos modelos también se determinó el patrón de fosforilación de treonina 1336, este residuo no está involucrado en la regulación de la actividad quinasa del IR.

Se determinó un aumento de la fosforilación en serina 994 en hígados de ratas obesas con respecto a las ratas normales. Este aumento no fue dependiente de insulina y se lo relacionó con una disminución en la actividad tirosina quinasa del receptor. Las isoenzimas PKC a , b y x catalizaron la fosforilación de la serina 994 in vitro . El crecimiento en los niveles de fosfoserina 994 no se observó en ratones trasgénicos PEPCK-bGH debido a que poseen elevada su actividad tirosina quinasa basal. El patrón de fosforilación de la treonina 1336 fue similar al que se observó en la fosforilación en tirosina del IR.

Nuestros resultados indicarían que la fosforilación de la serina 994 estaría involucrada en la regulación de su actividad tirosina quinasa del IR.

 

PAPEL DEL IGF-I (FACTOR DE CRECIMIENTO INSULINICO TIPO I) Y SU RECEPTOR EN UN TUMOR MAMARIO EXPERIMENTAL

Autor: Claudia COCCA

Director de tesis: Dra. Rosa María BERGOC

Area de investigación: Biología Celular

Lugar de trabajo: Laboratorio de Radiosisótopos - Cátedra de Física - F. F. y B.

Resumen

El objetivo general de esta tesis fue estudiar la participación del IGF-I y su receptor en las distintas etapas del desarrollo normal del tejido mamario y en la carcinogénesis mamaria de la rata inducido mediante el carcinógeno N-nitroso-N-metilurea (NMU). Se caracterizó al receptor IGF-IR en tejido mamario normal y en los tumores mamarios NMU-inducidos, localizándose su expresión en las células epiteliales. Por otra parte, se indujo el tumor mamario en ratas con el sistema IGF alterado de base debida a una diabetes experimental, observándose el desarrollo de un número significativamente menor de tumores por rata, con un mayor período de latencia y patrón histológico benigno. En este caso, la expresión de IGF-IR se detectó mayoritariamente en el componente fibroso de los tumores. Los niveles circulantes de tIGF-I durante el período de inducción tumoral en estos animales resultaron significativamente menores respecto a los no diabéticos.

El tratamiento con el hipoglucemiante glibenclamida de ratas portadoras de tumores mostró una significativa estabilización del crecimiento tumoral. El porcentaje de tumores que regresaron o se estabilizaron resultó mayor cuando los animales recibieron glibenclamida más tamoxifeno versus tamoxifeno sólo.

La caracterización del carcinoma mamario NMU-inducido en ratas diabéticas permitió establecer un modelo único hasta el presente para el estudio de ambas patologías coexistentes.

 

ESTUDIO BIOQUIMICO Y BIOFISICO DE LAS MEMBRANAS DEL RIÑON EN DESARROLLO.

Autor: Cecilia Laura D'ANTUONO

Director: Dra Norma B. STERIN de SPEZIALE

Area de investigación: Química Biológica

Lugar de trabajo: Cátedra de Biología Celular e Histología - F. F. y B.

Resumen

El riñón no se encuentra totalmente desarrollado al nacimiento caracterizandose por una baja síntesis de prostaglandinas. Se estudio del perfil de fosfolípidos de las membranas de ratas neonatas (10 días) y adultas (70 días) observándose un aumento en el contenido porcentual de esfingomielina con la edad. En cuanto a los ácidos grasos se observó un aumento en el contenido de 20:4 y 18:2 en función de la edad acompañado por una disminución de 14:0, 16:0, 18:1, 16:1, 20:3 y 22:6.

La ciclooxigenasa presentó una baja actividad a los 10 días que aumentó en función de la edad. Concluímos que la baja síntesis de protaglandinas observada en el neonato se debe a dos causas: a la baja disponibilidad de sustrato y a la menor actividad de ciclooxigenasa en el período neonatal.

La incorporación de ácido araquidónico en los fosfolípidos de las membranas está determinada por la actividad de acil-CoA sintetasa, que presentó cambios en sus características cinéticas durante el desarrollo.

Las membranas renales mostraron ser diferentes desde el punto de vista fisicoquímico cuando se estudiaron con sondas fluorescentes, aunque en sus liposomas reconstituídos las diferencias desaparecen por lo cual se concluye que se producen cambios en la interacción lípido-proteína durante el desarrollo. Esto se comprobó mediante estudios con fosfolipasas en los sistemas liposomales.

 

ESTUDIO MOLECULAR DEL GEN SUPRESOR TUMORAL RB1 EN FAMILIAS CON RETINOBLASTOMA

Autor: Viviana DALAMON

Director: Dra. Irene SZIJAN

Area de investigación: Biología Celular

Lugar de Trabajo: Cátedra de Genética y Biología Molecular - F. F. y B.

Resumen

El retinoblastoma (Rb) es el tumor ocular maligno más frecuente en la niñez (1:20000), y su diagnóstico temprano es fundamental para instaurar precozmente un tratamiento eficaz.

El principal objetivo de este trabajo fue detectar e identificar mutaciones en el gen RB1, así como ligar uno de los cromosomas homólogos a la mutación en una población de afectados de retinoblastoma.

Se utilizaron cuatro polimorfismos intragénicos para analizar el ADN de 69 familias con retinoblastoma y 38 tumores de afectados. Se identificó el alelo ligado a la mutación, su herencia parental y se determinó el riesgo en parientes de los afectados de desarrollar o transmitir la enfermedad. El 53% de los tumores analizados evidenció pérdida de heterocigosidad. Los polimorfismos elegidos se caracterizaron y se determinaron sus parámetros poblacionales.

Mediante la técnica de PCR-Heteroduplex-secuenciación se analizaron 25 afectados con retinoblastoma. Se identificaron 6 mutaciones exónicas, un polimorfismo intrónico y una secuencia discordante con lo publicado para esa región. Dos de las mutaciones exónicas identificadas no habían sido detectadas con anterioridad en otras poblaciones. Las mutaciones fueron rastreadas en los miembros de la familia, estableciendo la susceptibilidad al desarrollo tumoral en cada individuo.

En conjunto, las técnicas de biología molecular utilizadas conformaron un método de diagnóstico preciso y confiable para el estudio del gen supresor tumoral RB1 en afectados con retinoblastoma en nuestra población.

 

 

CAMBIOS ADAPTATIVOS EN LA DENERVACION Y SENSIBILIZACION INDUCIDA POR AGONISTAS DOPAMINERGICOS EN UN MODELO ANIMAL DE ENFERMEDAD DE PARKINSON

Autor: Marina A. DELFINO

Director: Dr. Oscar GERSHANIK

Consejero de Estudios y Supervisor de Tesis: Dra. Cristina ACEVEDO

Area de Investigación: Nuerociencias

Lugar de trebajo: Inst. de Investigaciones Farmacológicas (ININFA - CONICET) - F. F. y B.

Resumen

La enfermedad de Parkinson (EP) se debe a la pérdida progresiva de neuronas dopaminérgicas de la vía nigroestriada . Los síntomas son la bradiquinesia, rigidez y temblor. La levodopa es la droga más efectiva para el alivio de dicha sintomatología, aunque también se utilizan agonistas dopaminérgicos. La levodopa esta asociada a complicaciones motoras que ocurren a largo plazo. La exposición repetida a agonistas dopaminérgicos en modelos animales de la EP induce un proceso conocido como sensibilización. Dicho proceso se ve reflejado en un aumento de la actividad motora y movimientos anormales involuntarios. Tanto la respuesta terapéutica como las complicaciones motoras se vinculan al desarrollo de dicho fenómeno (sensibilización). El objetivo de este trabajo fue estudiar las modificaciones a nivel comportamental, bioquímico y funcional en un modelo animal de EP que producen distintos agonistas dopaminérgicos. Nuestros resultados nos permitieron diferenciar agonistas con distinto perfil farmacológico, por medio de pruebas comportamentales, concluyendo que el efecto antiparkinsoniano y el potencial disquinetogénico podrían ser el resultado de modificaciones funcionales en diferentes vías de salida de los circuitos motores. Además por medio de la resonancia magnética funcional y la espectroscopia pudimos caracterizar el modelo de supersensibilidad y algunas de las modificaciones estructurales y funcionales producto del tratamiento con agonistas dopaminérgicos.

 

 

ESTUDIO DEL MECANISMO DE ACCION DE LA BOMBA DE CALCIO DE ERITROCITOS HUMANOS (PMCA).

Autor: María Mercedes ECHARTE

Director: Juan P. ROSSI

Area de investigación: Biofísica

Lugar de trabajo: Cátedra de Química Biológica - F. F. y B.

Resumen

Hemos desarrollado una metodología en microescala para cuantificar los intermediarios fosforilados de la PMCA aislándolos mediante SDS-PAGE. Aplicando esta técnica hemos demostrado que el estado estacionario de E P depende de [ATP] de un modo complejo. Hemos estudiado además los efectos del Mg 2+ midiendo E P en presencia de 1 mM o 8 mM Mg 2+ . Le dependencia de E P con la concentración de ATP puede ser descripta por un polinomio de tercer grado, sugiriendo la participación del ATP en 3 pasos del ciclo de reacción.

Hemos determinado la actividad Ca 2+ -ATPase (v) en las mismas condiciones en que fue medido E P, y calculamos el número de recambio de E P (kp E P) como el cociente v/ E P. Observamos que cuando la concentración de Mg 2+ es saturante kp E P aumenta hiperbólicamente con [ATP]. Cuando el Mg 2+ es limitante, la dependencia de kp E P con la concentración de ATP presenta un comportamiento complejo que no puede ser explicado por el mecanismo de hidrólisis de ATP propuesto para la PMCA. Medimos la velocidad de desfosforilación de E P en presencia de 8 mM y 1 mM Mg 2+ , y 0.010 o 1 mM ATP.

De acuerdo a estos resultados proponemos una modificación del modelo del ciclo de reacción, que considera que el ATP acelera el cambio conformacional E 1 P ® E 2 P, a través de un nuevo intermediario de reacción E 1 P.ATP.

EpidemiologIa de la gonorrea en el Area metropolitana de Buenos Aires

Autor: Angela María Rosa FAMIGLIETTI

Director: Dr. Ramón de TORRES

Area de Investigación: Microbiología

Lugar de trabajo: Dpto. Bioquímica Clínica - F. F. y B.

Resumen

Durante 17 años (1985 - 2001) se investigó N. gonorrhoeae en 33747 pacientes

( 85,8 % varones) del Programa de ETS del Hospital de Clínicas de Buenos Aires.

La incidencia de gonorrea fue 11.9%, observándose un descenso significativo durante la década del 90 (5.2%).

La resistencia plasmídica a penicilina fue alta desde mediados de la década del 80 hasta la del 90 (35,1%), luego disminuyó a 7.2% en el año 2002; mientras que la resistencia cromosómica se mantuvo alrededor del 5 %, excepto en la década del 90 (19 %). Este descenso de la resistencia plasmídica se relacionó con un menor consumo de penicilina a partir del año 1992. Todos los gonococos fueron sensibles a ceftriaxona.

La actividad de ciprofloxacina fue equivalente a la de ofloxacina. Solamente dos cepas presentaron sensibilidad disminuida a estos antimicrobianos a pesar de su alto consumo a partir de 1992.

Eritromicina disminuyó su actividad, aumentando la resistencia de 3,6 % a 10,2% alcanzando 20 % en el nuevo milenio; y se relacionó con un mayor consumo de azitromicina a partir del año 1995. La resistencia a azitromicina siempre fue menor al 5 %.

No se observaron cepas resistentes a espectinomicina.

Los porcentajes de resistencia de tetraciclina disminuyeron de 51.9% hasta el 27.5 % actualmente. Solamente en una cepa la resistencia fue plasmídica.

Los auxotipos prevalentes fueron NR y Pro - (99.5%).

 

ACIDOS GRASOS POLIINSATURADOS DE LA FAMILIA w 3 Y RECUPERACION NUTRICIONAL. ESTUDIO EN MODELO EXPERIMENTAL

Tesista: Inés FERNANDEZ

Directora: Dra. Nora H. SLOBODIANIK

Area de investigación: Nutrición

Lugar de trabajo: Cátedra de Nutrición - F. F. y B.

Resumen

La malnutrición proteica severa al destete o el consumo de una dieta a base de harina de maíz al 6.5% de proteína deficitaria en lisina, provoca un frenado en la proliferación y maduración celular del timo de ratas en período de crecimiento activo.

En el presente trabajo, se analiza el efecto de la suplementación con distintas cantidades de EPA y DHA (AGPI w 3), seleccionándose aquella a la cual se observa la reversión de los efectos provocados sobre el timo. La administración diaria por vía oral de 24mg de EPA + DHA, junto con la dieta habitual o la de recuperación, logra revertir dichas alteraciones observándose además disminución en el número de células T inmaduras (Thy 1 + ). Por otra parte, esa cantidad no provoca efectos adversos sobre las pruebas de coagulación, el perfil de lípidos plasmáticos y el grado de estrés oxidativo a nivel hepático.

La detección, por cromatografía gaseosa, de valores séricos de EPA y DHA superiores en respuesta a la suplementación, avalarían la efectiva incorporación de los mismos al organismo, mientras que la tendencia a mayores niveles en tejido tímico, estarían sugiriendo el potencial efecto inmunomodulador de estos ácidos.

ESTUDIO DE LA INFLUENCIA HISPANA EN LA FARMACOTECNIA ARGENTINA DESDE LA EPOCA POSTCOLONIAL HASTA NUESTROS DIAS

Autor: Roberto Jorge GARCIA

Director: Dra. Guillermina LOPEZ ANDUJAR

Codirector: Dr. Carlos BREGNI

Area de investigación: Tecnología Farmacéutica

Lugar de trabajo: Cátedra de Farmacotecnia I - F. F. y B.

Resumen

En esta tesis se compendia toda la influencia hispana que hubo en nuestra Farmacotecnia Argentina, siguiendo un hilo conductor que comienza tomando desde los antecedentes históricos durante la época colonial y del virreinato, continuando con nuestros primeros gobiernos patrios y siguiendo paso a paso todos los hitos importantes que marcaron esta influencia hispana durante los siglos XIX y XX llegando hasta nuestros días.

PAPEL DE LA PROTEINA Z DEL VIRUS TACARIBE EN LA REPLICACION VIRAL

Autor: Rodrigo Omar JACAMO

Director: Dra. María Teresa FRANZE-FERNANDEZ

Consejero de Estudios y Supervisor: Dra. Rodolfo CAMPOS

Area de investigación: Biología Molecular

Lugar de trabajo: Centro de Virología Animal - CONICET

Resumen

El genoma del virus Tacaribe (TAC) codifica para cuatro proteínas, la nucleoproteína N, el precursor (GPC) de las glicoproteínas estructurales, la polimerasa L y la proteína Z con un dominio RING.

Usando un sistema de genética reversa, encontramos que la proteína Z inhibe la síntesis del ARN viral. En esta tesis, investigamos el mecanismo mediante el cual Z ejerce su acción inhibitoria. Para ello, estudiamos interacciones entre Z y las proteínas virales (L y N) involucradas en la síntesis del ARN viral.

Mediante coinmunoprecipitación y, cuando Z fue expresada fusionada a la glutation S-transferasa, por adsorción a Glutation-Sefarosa, demostramos que Z interactuó con la proteína L pero no con N, y que la actividad inhibitoria de Z depende de su capacidad para interactuar con L.

Mediante mutaciones en la proteína Z, encontramos que la integridad de la estructura RING y la presencia de los aminoácidos dentro de la región C-terminal y probablemente de aquellos residuos adyacentes al extremo N-terminal del dominio RING, contribuyen a la interacción entre Z y L y son requeridos para su actividad inhibitoria. Además, demostramos, por primera vez, interacción entre las proteínas L y N.

RECEPTORES A HISTAMINA EN CELULAS U-937: IMPLICANCIAS EN LOS PROCESOS DE PROLIFERACION Y DIFERENCIACION CELULAR

Autor: Bibiana LEMOS LEGNAZZI

Director: Dr. Carlos DAVIO

Area de investigación: Farmacología

Lugar de trabajo: Lab. de Radioisótopos - Cátedra de Física - F. F. y B. e Inst. de Biología y Medicina Experimental CONICET

Resumen

La utilización de agentes inductores de diferenciación es una opción promisoria para el tratamiento de diversas leucemias. Sobre la base de los antecedentes que involucran a la histamina en los procesos de proliferación y diferenciación celular, nos propusimos la siguiente hipótesis de trabajo : La histamina regula los procesos de proliferación y diferenciación en células promonocíticas humanas.

Utilizando células U-937, modelo de diferenciación celular monocitaria, demostramos que la histamina a través de los receptores H2, incrementa los niveles de AMPc, respuesta involucrada en procesos de diferenciación. A diferencia de forskolina y PGE2, agentes que aumentaron el AMPc en niveles similares, la histamina no indujo maduración celular. Demostramos que la diferencia entre las respuestas de estos agentes radicaba en la duración de la señal. El receptor H2 sufre un rápido corte de la señal, debido a la fosforilación del receptor mediada por GRKs, seguido de una lenta internalización y reciclado de los receptores a la membrana e inducción de fosfodiesterasas.

Estos resultados indican que la importancia del mecanismo de desensibilización de los receptores no solo reside en la terminación de una respuesta sino que forma parte integral de la misma. Los segundos mensajeros producidos deben estar regulados de manera muy estricta en concentración y tiempo para lograr la respuesta específica.

PAPEL DE LA NEUROTENSINA EN LA NEUROTRANSMISION CENTRAL. EFECTOS DEL PEPTIDO SOBRE LA ACTIVIDAD ATPásica NEURONAL.

Autor: María Graciela LOPEZ ORDIERES

Director: Georgina RODRIGUEZ de LORES ARNAIZ

Area de investigación: Farmacología

Lugar de trabajo: Cátedra de Farmacología - F. F. y B. e Inst. de Biología Celular y Neurociencias “Prof. Dr. Eduardo de Robertis” - F. Med.

Resumen

La neurotensina (NT) es un tridecapéptido, que a nivel del SNC puede comportarse como un neurotransmisor o como un neuromodulador. En consecuencia, para establecer su papel en la transmisión del sistema nervioso se decidió evaluar las posibles acciones del péptido sobre enzimas clave en la neurotransmisión: Na + , K + -ATPasa, K + - p -nitrofenilfosfatasa (K + - p -NFFasa), la acetilcolinesterasa y la citocromo oxidasa. En un rango de concentración 10 -8 -10 -6 M, la NT produjo una inhibición del 20-50% de la actividad de Na + , K + -ATPasa de membranas de corteza cerebral y de cuerpo estriado, sin afectar a las membranas de cerebelo. La administración aguda de haloperidol previno la inhibición de la Na + , K + -ATPasa, indicando que una disminución en la actividad dopaminérgica afecta al sistema de la NT. La actividad de K + - p -NFFasa se inhibió si el medio contenía bajas concentraciones de K + o era suplementado con ATP y ClNa. Los efectos inhibitorios descriptos se bloquearon por el antagonista SR 48692, lo que sugiere la participación del receptor NTS1. La NT produjo la inhibición de la actividad de citocromo oxidasa mitocondrial. En un rango de concentración de NT 10 -7 -10 -5 M no modificó la actividad de acetilcolinesterasa, pero fue suficiente para producir la inhibición de la fijación del ligando benzilato de quinuclidina marcado a distintas áreas cerebrales, sugiriendo la modulación del sistema colinérgico por la NT. Por lo tanto, el estudio del efecto de la NT sobre la actividad de enzimas implicadas en la neurotransmisión, así como los estudios de fijación de ligandos, aportan evidencias directas de la participación de la NT en los eventos que ocurren a nivel de la sinapsis.

MECANISMO DE DEGRADACION PROTEICA MEDIADO POR UBICUITINA EN LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER

Autor: Mariella LOPEZ SALON

Director: Dra. Juana PASQUINI

Codirector: Dr. Eduardo CASTAÑO

Area de investigación: Química Biológica

Lugar de trabajo: Dpto. de Química Biológica - F. F. y B.

Resumen

La EA se caracteriza por la presencia de ONF y placas seniles formadas por A b . Con el objeto de investigar el papel de la vía Ub-proteasoma en la EA y en el procesamiento de la memoria, estudiamos su actividad en muestras de corteza cerebral de EA, encontrando una alteración para formar UbPC en FS por disminución de la actividad de E1, debido a su deslocalización en los ONF. El A b produce un aumento en la expresión de UbPC y E1, y una inhibición de la actividades del proteasoma-26S, en cultivos de astrocitos y neuronas. La degradación del A b 1-42 , mediada por el proteasoma, fue inhibida por lactacistina. El tratamiento de los cultivos con lactacistina previo a la exposición al A b , produjo una disminución en la viabilidad celular, posiblemente debido a la inhibición de la degradación del A b . La vía Ub-proteasoma es crucial para el establecimiento de la MLP debido a que la lactacistina causó una amnesia retrógrada en ratas entrenadas para un determinado aprendizaje. Dicho entrenamiento resultó en un incremento de la ubicuitinización y de las actividades proteolíticas del proteasoma-26S y una disminución en los niveles de IkB, sustrato de la vía Ub-proteasoma.

ESTUDIO DE LA RETENCION DE COMPUESTOS BIOACTIVOS POR CROMATOGRAFIA ELECTROCINETICA PARA ESTIMAR SU HIDROFOBICIDAD

Autor: Silvia LUCANGIOLI

Director: Dra. Clyde CARDUCCI

Area de investigación: Química Analítica

Lugar de trabajo: Cátedra de Química Analítica - F. F. y B.

Resumen

Se propone estudiar el comportamiento de compuestos biactivos en sistemas electroforéticos por cromatografía electrocinética (EKC) para estimar indirectamente la hidrofobicidad. Los grupos de analitos elegidos fueron betametasona, 17 y/o 21 derivados, inmunosupresores y 16 ácidos biliares (AB) libres, glico y tauroconjugados. La retención de estos analitos fue estudiada en diferentes fases pseudo-estacionarias de sistemas micelares y con microemulsión con base dodecilsulfato de sodio (SDS) y nuevos sistemas con biosurfactantes como fosfatidilcolina, componente principal de las biomembranas.

Se determinaron los factores de retención (k´) con el cálculo de movilidades electroforéticas y los log P mediante una curva de calibración con diez compuestos de referencia. Se verificó la correlación de los log P calculados con los log Po/w de literatura (experimentales o de software) o determinados en nuestro laboratorio para datos no disponibles.

Los sistemas de microemulsión con fosfatidilcolina resultaron mejores estimadores de la hidrofobicidad para corticoides e inmunosupresores. Para ácidos biliares se observó una correlación entre los log k´ y su detergencia.

Con una metodología simple, rápida, de bajo costo y confiable se proponen nuevos modelos de microemulsión para la EKC para estimar la hidrofobicidad en el diseño de nuevas drogas, en ensayos de liberación con adaptación también a los sistemas actuales de microfluídos.

CARACTERIZACION GENETICA DE b -LACTAMASAS EN VIBRIO CHOLERAE

Autor: Roberto Gustavo MELANO

Director: Dr. Eberto PETRONI

Consejero de Estudios y Supervisor de Tesis: Dr. Ramón A. de TORRES

Area de investigación: Microbiología

Lugar de trabajo: Depto. Bacteriología - INEI - ANLIS "Dr. Carlos G. Malbran"

Resumen

Del estudio de la resistencia a antibióticos b -lactámicos en 1947 cepas clínicas de V. Cholerae O1, sólo se detectó resistencia a ampicilina en 34 aislamientos, 28 de los cuales también mostraron un fenotipo que sugirió la presencia de b -lactamasas de espectro extendido (BLEEs). De acuerdo a sus perfiles de sensibilidad, se seleccionaron y estudiaron cuatro aislamientos representativos. Se identificaron los genes bla TEM -1 en las cuatro cepas estudidas, bla CTX-M-2 en tres aislamientos de V. Cholerae O1 y bla PER-2 en la restante, todos ubicados sobre sendos plamidos conjugativos. El estudio de sensibilidad en 669 aislamientos de V.cholerae no-o1, no-O139 mostró un fenotipo no sensible a ampicilina (sensibilidad intermedia, más resistencia, Ap NS ) en aproximadamente el 30%. En un subset de 131 cepas Ap NS , se detectaron dos enzimas con pls de 5,2 (42%) y 5,4 (58%), con actividad de b -lastamasas de espectro ampliado. Se estudiaron dos de estos aislamientos, seleccionados en función de los pls de las b -lactamasas. Se clonaron y secuenciaron dos nuevos genes, denominados bla CARB-7 y bla CAR-9 que mostraron un 99,3% de identidad. CARB-7 y CARB-9 mostraron una identidad aminoacidica del 99%, del 88% con CARB-6 y un promedio de 84% con otras enzimas de la familia CARB-. Se observaron valores de CIMs 4 a 8 veces menores para CARB-9 en relación a CARB-7. bla CARB-9 y bla CARB-7 fueron localizados en el superintegrón de V. Cholerae , pero en ubicaciones diferentes. La comparación de las regiones flanqueantes de todos los genes bla CARB- reportados a la fecha indica que la familia CARB- constituye un grupo de carbenicilinasas codificadas en cassettes.

ALTERACIONES MOLECULARES, HISTOPATOLOGICAS Y DE CONDUCTA EN MODELOS ANIMALES DE LA ENFERMEDAD DE HUNTINGTON

Autor: Liliana MENALLED

Director: Dr. Modesto RUBIO

Codirectora: Dra. Marie-Françoise CHESSELET

Area de investigación: Farmacología

Lugar de trabajo: Inst. de Investigaciones Farmacológicas (ININFA-CONICET) - F. F. y B. y Fac. de Medicina - Univ. de California - Los Angeles (UCLA)

Resumen

La enfermedad de Huntington es causada por una expansión anormal de tripletes de CAG en el gen codificante de huntingtina. Se caracteriza por alteraciones del movimiento, psiquiátricas y cognitivas. En este trabajo examinamos ratones (modelos knock-in) que llevan la mutación responsable de la enfermedad inserta en el gen de huntingtina murino (94 y 140 repeticiones de CAG, animales KI-94CAG y KI-140CAG, respectivamente). Ambos modelos desarrollaron alteraciones motoras similares a edad temprana. Los animales KI-94CAG presentaron desregulación de la transcripción genética en ausencia de muerte celular. Esto sugiere que una etapa de disfunción celular precede a la muerte celular. Agregados de huntingtina mutada, cuyo papel en la neuropatología es controversial, fueron observados en el estriado de animales KI-94CAG. Estos se encontraron más ampliamente distribuidos en los animales KI-140CAG, donde aparecieron en forma temprana en regiones que reciben densa inervación dopaminérgica, apoyando la hipótesis que sugiere que la dopamina cumple un papel importante en la enfermedad. Más aún, la dopamina podría ser responsable del daño oxidativo detectado en el estriado de animales KI-94CAG. En ambos modelos, los agregados se observaron consistentemente muchos meses después del desarrollo de alteraciones motoras y moleculares, señalando que los mismos no son responsables causales de dichas alteraciones.

RECEPTORES A HISTAMINA. EFECTOS DEL ENTORNO CELULAR EN LA TRANSDUCCION DE LA SEÑAL. INTERPRETACION A PARTIR DE MODELOS TEORICO-EXPERIMENTALES

Autor: Federico MONCZOR

Director: Dr. Carlos DAVIO

Area de investigación: Farmacología

Lugar de trabajo: Lab. de Radioisótopos - Cátedra de Física - F. F. y B.

Resumen

El comportamiento de una célula se encuentra determinado por señales químicas provenientes del entorno, llamadas ligandos, y los receptores de membrana juegan un papel fundamental en dicho proceso. La utilización de modelos teóricos y experimentales permite explicar, interpretar y predecir el comportamiento de los ligandos en un determinado sistema.

Como hipótesis de la presente tesis se plantea que el comportamiento de un ligando depende del sistema en que se evalúe, y que el mismo está íntimamente supeditado a la relación estequiométrica de las diferentes proteínas involucradas en las cascadas de señalización.

El corolario de los estudios teóricos-experimentales realizados, es que efectivamente la capacidad de un receptor para transducir la señal desde el exterior hacia el interior de la célula depende de características específicas del sistema en que se encuentre, particularmente de la relación estequiométrica entre los diferentes actores de la cascada de transducción, que determinan la aparición de fenómenos de respuesta cruzada y promiscuidad. Así, el comportamiento de un ligando dependerá del sistema en el que sea evaluado, ya que la complejidad de los sistemas se refleja en la gran variedad de respuestas biológicas, y los resultados obtenidos en un sistema no pueden, en principio, ser trasladados a otros.

REGULACION MOLECULAR DE LA AUTOFAGIA. LOCALIZACION INTRACELULAR DE LA PROTEINA GTPASA RAB24 Y SU RELACIO CON LA VIA AUTOFAGICA

Autor: Daniela Beatriz MUNAFO

Director: Dra. María Isabel COLOMBO

Consejero de Estudios y Supervisor: Dra. Norma STERIN de SPEZIALE

Area de investigación: Biología Celular

Lugar de Trabajo: Lab. de Biología Celular y Molecular - Instituto de Histología y Embriología - Fac. de Ciencias Médicas - Univ. Nacional de Cuyo.

Resumen

En este trabajo de tesis hemos desarrollado un nuevo método rápido y sencillo para monitorear el transporte autofágico intracelular basado en la acumulación de monodansilcadaverina (MDC-marcador específico de autofagosomas) en células eucariotas. La medición espectrofluorométrica y en el análisis morfológico por microscopía de fluorescencia de este compuesto sirven para evaluar la autofagia frente a diferentes estímulos y que pueden aplicarse al conocimiento de nuevos reguladores moleculares de esta vía. Además, hemos estudiado la localización subcelular de la proteína GTPasa Rab24 y su relación con la vía autofágica. Rab24 se distribuye en forma reticular asociada al retículo endoplásmico, cis-Golgi y compartimento intermedio ER-Golgi. Cuando se induce la autofagia a través del ayuno se produce un cambio drástico en la localización de Rab24 y aparece entonces en estructuras puntiformes, tubulares y vesiculares que fueron caracterizadas como compartimentos de la vía autofágica en diferente grado de maduración. La asociación de Rab24 fue dependiente del correcto procesamiento de LC3 (proteína específica de la membrana de autofagosomas). Para estudiar el papel funcional de Rab24 generamos mutantes y caracterizamos su afinidad a los nucleótidos de guanosindifosfato y guantosintrifosfato. También, desarrollamos ensayos in vitro de interacción entre proteínas que permitieron identificar proteínas que interactúan con Rab24.

RELEVAMIENTO DE LAS PLANTAS MEDICINALES DE LA PROVINCIA DE ENTRE RÍOS. ANÁLISIS EXOMORFOLÓGICO DE LAS PARTES USADAS. PROSPECCIONES DE LA MEDICINA TRADICIONAL ENTRERRIANA.

Autor: Juan de Dios MUÑOZ

Director: Prof. Dr. Alberto Angel GURNI

Area de investigación: Farmacobotánica y Farmacognosia

Lugar de trabajo: Cátedra de Botánica Sistemática - Fac. Ciencias Agropecuarias - Univ. Nacional de Entre Ríos y Cátedra de Farmacobotánica - F. F. y B.

Resumen

La flora de la provincia de Entre Ríos (Argentina) resultó especialmente interesante para los naturistas europeos llegados al país por ser la síntesis de cuatro corrientes florísticas. Se incluyen en esta tesis un resumen del número y distribución de sus plantas en distintas familias y sus relaciones con el resto de la flora argentina, una síntesis de suelos y clima, las tribus indígenas y sus conocimientos farmacobotánicos y se mencionan los naturalistas que estudiaron su flora. Se hace especial referencia al grave problema que representa la desaparición de comunidades arbóreas y praderas por la expansión agropecuaria. Se valoriza la medicina tradicional en distintas culturas del mundo y se discute la necesidad de relacionarla con la medicina docta occidental. Se destaca la importancia que han tenido las plantas en la determinación de las trayectorias de la cultura moderna y la imperiosa necesidad de conservar la biodiversidad para evitar una catástrofe mundial. Basándose en veintidós años de exploración y colección botánica de quien suscribe, sumado a los conocimientos aportados por informantes calificados y bibliografía especializada, se presenta la descripción de 485 especies medicinales, y una variedad, de la flora de la Provincia de Entre Ríos, mencionando ejemplares de herbario de referencia, claves botánicas, utilidad de las distintas partes de las plantas y claves para su identificación en el mercado. Se expone una hipótesis sobre el futuro de las plantas medicinales e ideas para su conservación.

LINFOCITOS INTESTINALES INTRAEPITELIALES: COMPORTAMIENTO DEL TNF- a Y MOLECULAS RELACIONADAS EN UN MODELO DE INMUNODEFICIENCIA SECUNDARIA EN RATAS WISTAR.

Autor: Sofía OLMOS

Director: Dra. María Estela ROUX

Area de investigación: Inmunología

Lugar de trabajo: Lab. de Inmunología Celular - Cátedra de Fisiopatología - F. F. y B.

Resumen

En un modelo de inmunodeficiencia secundaria (por déficit proteico severo al destete en ratas Wistar y renutridas con dieta de caseína al 20% por 21 días, grupo R21), estudios realizados en linfocitos intraepiteliales intestinales (LIE) demostraron que existe aumento de:

•  Citoquinas inflamatorias: TNF- a e IFN- g y reguladoras: TGF- b .

•  El TNF- a co-localiza con LIE TCR g d y CD8 a a .

•  TNF-RII que co-localiza con LIE TCR g d .

•  NF- k B en la fracción citosólica y disminución en la fracción nuclear. Su activación es independiente de TNF- a .

La IL-10 está disminuida.

La administración oral de timomodulina TmB, durante los 21 días de realimentación, revirtió todas las alteraciones observadas en el grupo R21.

Concluimos por lo detallado que :

•  Estamos en presencia de un proceso inflamatorio debido a la dextrina contenida en la dieta, que actuaría como un antígeno luminal provocando un fenómeno de tolerancia oral ( Lymphology, 2003, 36 -1-: 26-38 ). El hallazgo del aumento del TGF- b , que se conoce, activa la población Th3 o Tr corrobora la existencia del fenómeno de tolerancia y debido a sus funciones inmunosupresoras podría controlar los daños inducidos por el estado inflamatorio.

•  El inmunomodulador, TmB, actuaría como agente terapéutico en inmunodeficiencias secundarias como la causada por malnutrición.

PARTICIPACION DEL SISTEMA UBICUITINA - PROTEASOMA EN LA APOPTOSIS Y EN LA DIFERENCIACION DEL SISTEMA NERVIOSO

Autor: Laura Lorena PASQUINI

Director: Eduardo Francisco SOTO

Area de investigacion: Química Biológica

Lugar de trabajo: Cátedra de Química Biológica Patológica - F. F. y B.

Resumen

Se estudió la participación de la vía Ubicuitina(Ub)-proteasoma en la degradación de proteínas, en la apoptosis y en la diferenciación de células neurales.

Los resultados indican que:

-El sistema Ub-proteasoma participa en la remoción de proteínas oxidadas.

-La inhibición de la actividad del proteasoma 26S en células granulares de cerebelo y en células de Schwann induce apoptosis.

- En neuronas de la corteza cerebral un exceso de hormona tiroidea produce un aumento de la apoptosis, de los conjugados-Ub-proteína(UbPC) y de la expresión de genes-Ub. Resultados opuestos se obtuvieron en células granulares de cerebelo. Así, la apoptosis en diferentes tipos de neuronas podría estar mediada por mecanismos diferentes siendo la expresión de Ub marcadora de apoptosis. Contrariamente, en oligodendrocitos la apoptosis inducida por T 3 no va acompañada por cambios en el sistema Ub-proteasoma.

-En cultivos de astrocitos y de oligodendrocitos, los tratamientos con ceramida inducen cambios transcripcionales y traduccionales de ciertos genes-Ub. Estos pueden ser consecuencia del incremento de sustratos de ubicuitinización (Bcl-2 e I k B). En astrocitos estos cambios llevan al desplazamiento de NF k B hacia el núcleo. Contrariamente en oligodendrocitos llevan a la apoptosis.

-La disminución en la actividad del proteasoma en células oligodendrogliales produce retiro del ciclo celular y diferenciación.

RELACION ENTRE LA ESTRUCTURA Y LA ACTIVIDAD ALERGENICA DE PROTEINAS DE VENENOS DE AVISPAS

Autor: María Laura PIRPIGNANI

Director: Dra. Mirtha BISCOGLIO

Area de investigación: Química Biológica

Lugar de trabajo: Dpto. de Química Biológica - F. F. y B.

Resumen

Los venenos de avispas contienen Antígeno 5. Se conoce la estructura primaria y la conducta alergénica de Antígenos 5 de venenos de avispas del Hemisferio Norte. En este trabajo se estudió el Antígeno 5 de P. scutellaris , que habita Sudamérica:

•  se demostró que tanto el veneno como la proteína purificada tienen menor capacidad de generar anticuerpos de tipo IgE que cualquier otro miembro de la familia;

•  el antígeno se purificó a homogeneidad;

•  se determinó su composición en aminoácidos, grado de glicosilación y estructura primaria completa;

•  se obtuvo la proteína recombinante;

•  el alineamiento de secuencias indicó cambios puntuales que podrían relacionarse con su menor actividad alergénica;

•  se realizaron estudios de predicción de estructura secundaria y accesibilidad al solvente;

•  el conocimiento estructural adquirido permitió obtener un modelo espacial que contribuyó a definir similitudes y diferencias con el de V. vulgaris, único con estructura terciaria conocida.

El conjunto de los resultados contribuye al conocimiento de la actividad alergénica de estas proteínas sobre bases moleculares. Además, confirma la presunción de que el Antígeno 5 de P. scutellaris es una variante hipoalergénica, que podría utilizarse en el diseño de híbridos para inmunoterapia.

GENETICA MOLECULAR DE LAS ENFERMEDADES TIROIDEAS HEREDITARIAS:

 

EXPRESION NORMAL Y PATOLOGICA DE LOS GENES TIROIDEOS

Autor: Carina Marcela RIVOLTA

Director: Profesor Dr. Héctor M. TARGOVNIK

Area de Investigación: Biología Molecular

Lugar de trabajo: Cátedra de Genética y Biología Molecular - F. F. y B.

Resumen

Se ha identificado una nueva mutación en el gen de TG humana, una transversión G a T en la posición +1 del sitio dador de splicing del intrón 30 en hermanos afectados de hipotiroidismo congénito y bocio. Previamente fue caracterizada la unión intrón 29/exón 30/intrón 30 del gen de la TG.

Dos nuevos marcadores microsatélites presentes en los intrones 29 y 30 del gen de TG fueron genotipificados y caracterizados. El empleo de los mismos será conveniente en análisis de ligamiento en hipotiroidismo congénito con o sin bocio.

Se han identificado en el gen de TPO 8 polimorfismos descriptos previamente, 3 nuevos , 1 inserción-duplicación conocida: p.R396fsX472 y 5 nuevas mutaciones inactivantes asociadas con hipotiroidismo congénito con bocio: p.N129fsX208, p.N307T, p.V433M, p.P499L , p.C808R.

Cinco mutaciones han sido identificadas en el gen THR b en 5 familias con resistencia generalizada a hormonas tiroideas. Dos de ellas p.P453T y p.R338W son conocidas. Las tres mutaciones restantes : p.I431M, p.L341P y c.1297-1304delGCCTGCCA no fueron descriptas previamente y presentaron un origen “de novo”. La identificación de nuevas mutaciones y el desarrollo de nuevas herramientas moleculares (directas e indirectas) contribuirán al mejoramiento del diagnóstico y a la aplicación del tratamiento más adecuado en las dos patologías analizadas.

EXPRESION Y ACTIVIDAD BIOLOGICA DE MIOSTATINA RECOMBINANTE HUMANA

Autor: Jorge Néstor ROMERO ARTAZA

Director: Dr. Néstor GONZALEZ CADAVID

Codirector: Dr. Marco PIZZOLATO

Area de investigación: Biología Molecular

Lugar de trabajo: Charles Drew University School of Medicine and Science

Harbor - UCLA Medical Center - Los Angeles - CA - USA

Resumen

La perdida de masa muscular (sarcopenia) asociada a envejecimiento, infecciones crónicas, etc., es un serio problema de salud publica, cuyo mecanismo se desconoce al nivel molecular. Recientemente se identifico un regulador negativo de la masa muscular producido en el músculo esquelético, denominado miostatina, cuyos niveles aumentan en la sarcopenia. El objetivo de este trabajo fue clarificar el mecanismo de acción de la miostatina sobre la masa muscular esquelética. Se demostró que la miostatina recombinante humana inhibe la replicación celular sin producir apoptosis en células musculares de ratón (C2C12), y se caracterizo el procesamiento post-traduccional del respectivo cDNA en células no musculares, y en el músculo esquelético de rata. Se definió la expresión endógena de miostatina en C2C12, su localización subcelular, y la estimulación de esta expresión por glucocorticoides, y los niveles de miostatina se correlacionaron con la expresión de marcadores de miogénesis. Se observo que en el músculo esquelético, la perdida de masa muscular por glucocorticoides esta asociada con niveles elevados de miostatina. Finalmente, se determino que la hiperexpresión de miostatina en el músculo esquelético en un ratón transgenico generado por nuestro grupo lleva a la perdida de masa muscular y la reducción del tamaño de las fibras musculares.

LIPOPROTEINAS MODIFICADAS EN PACIENTES CON RIESGO ELEVADO DE ATEROSCLEROSIS

Autor: Silvia SANGUINETTI

Director: Dra. Laura SCHREIER

Area de investigación: Bioquímica Clínica

Lugar de trabajo: Lab. de Lípidos y Lipoproteínas - Dpto. Bioq. Clínica - F. F. y B.

Resumen

Las modificaciones de las lipoproteínas aumentan su potencial aterogénico o disminuyen su capacidad protectora. La detección de estas modificaciones y la evaluación de interacciones entre lipoproteínas y sustancias moduladoras de la oxidación contribuiría al conocimiento del proceso aterogénico. Se desarrollaron y validaron métodos para determinar en humanos la susceptibilidad de LDL y HDL a la oxidación con Cu(II), la glicación de LDL y HDL, así como la medida de la acción antioxidante de HDL durante la oxidación de LDL. En LDL de pacientes con enfermedad aterosclerótica normo- y dislipémicos, se encontró una composición alterada asociado a una mayor oxidabilidad, en comparación con controles sanos. En HDL de pacientes diabéticos tipo 2 se encontró mayor grado de glicación, mayor oxidabilidad y una acción antioxidante conservada. En estudios con sustancias que modulan la oxidación de lipoproteínas se encontró que el óxido nítrico inhibió acciones prooxidantes y potenció acciones antioxidantes ejercidas por el ácido úrico durante la oxidación de LDL con Cu(II). En estudios con paraoxonasa purificada se exploró la actividad peroxidasa de paraoxonasa sobre diversos sustratos, observándose una inactivación de la enzima durante la incubación con sustratos oxidados. En presencia de óxido nítrico se observó una potenciación de la actividad peroxidasa de paraoxonasa.

ROL DE LA P450AROMATASA Y DEL TGB b 1 EN EL TESTICULO HUMANO PREPUBERAL. DESARROLLO DE UN MODELO TRANSGENICO CON BLOQUEO INDUCIBLE DE LA VIA DE SEÑALIZACION DE TGB b EN EL TESTICULO

Autor: Nora SARACO

Director: Dra. Alicia BELGOROSKY

Codirector: Dr. José SAEZ

Consejero de Estudios y Supervisor: Dr. Héctor TARGOVNIK

Area de investigación: Biología Molecular

Lugar de trabajo: Lab. De Investigación - Hospital de Pediatría "J. P. Garrahan" e

Inst. Federatif de Recherches en Endocrinologie de Lyon - Francia

Resumen

Los estrógenos juegan un rol en la regulación de la función testicular. La P450arom en el testículo humano adulto se localiza en las células de Leydig. No se conoce su localización durante el período prepuberal. Se ha descrito al TGF b 1 como regulador autocrino/paracrino de la función testicular. Asimismo, el TGF b 1 estimula la expresión de P450arom en diferentes tipos celulares. Se estudió la expresión de P450arom y TGF b en el testículo humano prepúber. Se inició el desarrollo de un modelo transgénico que bloquee la vía de señalización de TGF b . Se observó mayor abundancia del ARNm de P450arom en tejido testicular tumoral y en el período neonatal, y una correlación negativa con la edad. En cultivos celulares, el ARNm de P450arom disminuye durante los días de cultivo mientras aumenta la testosterona. El TGF b 1 se localiza en células intersticiales, la proteína y el ARNm son más abundantes en el período neonatal. Existe una correlación positiva entre los niveles del ARNm de P450arom y TGF b 1. Se ha descrito en el período neonatal un crecimiento en la masa testicular y una disminución del índice apoptótico. Se propone como hipótesis que los estrógenos intratesticulares y el TGF b 1 podrían ser factores implicados en la definición de la masa testicular en el período neonatal.

FORMACION Y LIBERACION DE EXOSOMAS: REGULACION POR MEDIO DE LA GTPasa Rab11 Y EL ION CALCIO

Autor: Ariel SAVINA

Director: Dra. María Inés COLOMBO

Consejero de Estudios y Supervisor: Dra. Norma STERIN de SPEZIALE

Area de investigación: Biología Celular

Lugar de trabajo: Lab. Biología Celular y Molecular - Fac. Ciencias Médicas -

Univ. Nacional de Cuyo

Resumen

La fusión de cuerpos multivesiculares (MVBs) con la membrana plasmática resulta en la liberación al espacio extracelular de las vesículas internas llamadas exosomas . Las células hematopoyéticas K562, liberan exosomas enriquecidos en ciertas proteínas como es el receptor de transferrina (RTf).

Rab11, una GTPasa que regula el tráfico del RTf, está expresada en éstas células en gran cantidad respecto a otras Rabs. Células K562 fueron transfectadas para sobreexpresar Rab11 cepa salvaje y mutantes y evaluar si la formación de MVBs y liberación de exosomas estaban alteradas. La sobreexpresión de Rab11wt estimuló esta vía, mientras que la mutante inactiva la inhibió.

El ion calcio actúa como estimulador de la exocitosis a partir de su rol en la fusión de membranas. Para evaluar si esta exocitosis era calcio-dependiente se incrementó el nivel intracelular de este ion por medio de distintos agentes y se aplicaron quelantes de este ion. Se analizó la liberación de exosomas y se observó que el incremento de calcio estimuló la secreción, en tanto que los quelantes la inhibieron.

Estos datos indican que tanto Rab11 como calcio regulan la vía exosomal. Posteriormente se evaluó si las dos regulaciones actuaban en forma coordinada y se observó que rab11 y calcio, serían requeridos en la etapas de formación de MVBs y que posiblemente calcio sea también requerido en la etapa de fusión de éstos con la membrana plasmática.

INTERPRETACION CINETICA DE DROGAS QUE PRESENTAN PERFILES PLASMATICOS CON MULTIPLES PICOS

Tesista: Paula SCHAIQUEVICH

Director: Dr. Modesto RUBIO

Codirector: Dra. Viviana NISELMAN

Area de Investigación: Farmacología

Lugar de trabajo: Inst. de Investigacines Farmacológicas - (ININFA - CONICET) - F. F. y B.

Resumen

En la presente tesis doctoral se estudió la cinética de paracetamol y de ranitidina por su particularidad de exhibir perfiles plasmáticos y salivares con picos secundarios al de absorción principal. La importancia de la correcta caracterización de la cinética reside finalmente en el cálculo de la dosis terapéutica adecuada.

Los datos experimentales se ajustaron según criterios modelo- independientes y modelos compartimentales basados en recirculación enterohepática y múltiples sitios de absorción. De los modelos estudiados, se propuso aquel que ofrecía el mejor ajuste desde un punto de vista matemático y fisiológico. Para ello, se estudarion algunos procesos fisiológicos que determinan la existencia o bien modulan la magnitud de los picos secundarios en el humano y la rata.

La permeación de ranitidina fue analizada en el íleon aislado de rata junto al análisis de la influencia de la glicoproteína-P en el proceso.

Otro mecanismo potencialmente capaz de incidir en forma del perfil del paracetamol es el fenómeno de recirculación entero-salivar, el cual fue evaluado en el hombre.

Por último, se realizó una aproximación al estudio de la secreción salivar de paracetamol por las glándulas submaxilares de rata y la influencia de la glicoproteína-P en la disposición de la droga en el animal.

EVALUACION DE LOS ACIDOS BILIARES SERICOS EN PACIENTES CON INSUFICIENCIA RENAL CRONICA SIN TRATAMIENTO Y ANTE DISTINTAS MODALIDADES TERAPEUTICAS COMO DIALISIS Y TRANSPLANTE

Autor: Valeria TRIPODI

Director: Dra. Clyde CARDUCCI

Area de investigación: Bioquímica Clínica

Lugar de trabajo: Cátedra de Química Analítica - F. F. y B.

Resumen

Este trabajo evalúa los niveles de ácidos biliares séricos (ABS) en pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC) sin tratamiento, pacientes hemodializados con y sin prurito y pacientes con trasplante renal bajo tratamiento con distintas drogas inmunosupresoras. La finalidad de dicho estudio fue determinar si existe alguna relación en la IRC con el nivel de ABS totales (ABST) y el prurito que padece una gran cantidad de pacientes hemodializados. Para llevar a cabo este proyecto fue necesario desarrollar y optimizar una nueva metodología analítica altamente sensible, que no se encontraba disponible hasta el presente.

Se observó que los ABST se encuentran elevados en todos los pacientes con IRC correlacionándose con la intensidad de prurito y que disminuyen luego del tratamiento hemodialítico hasta valores de referencia. Evaluando los ABST en pacientes trasplantados que recibían ciclosporina A (CyA) como inmunosupresor, se observó un aumento de los mismos producto del efecto hepato y nefrotóxico de la CyA.

Por último, se desarrolló, optimizó y validó una técnica por electroforesis capilar que permite, por primera vez, determinar simultáneamente 15 ABS de manera rápida y sencilla con el fin de evaluar los perfiles individuales de los mismos.

Evaluando dichos perfiles en cada grupo de pacientes, se observó que el aumento de ABS en la IRC es a expensas de los más tóxicos, lo cual se hace más evidente en los pacientes con prurito, hecho que podría explicar la causa del mismo.

ESTUDIO CONFORMACIONAL DE b -LACTAMASA MEDIANTE FOTOMARCACION CON SIAZIRINA

Autor: DANIELA URETA

Director: Dr. José M. DELFINO

Area de investigación: Química Biológica

Lugar de trabajo: IQUIFIB - Dpto. de Química Biológica - F. F. y B.

Resumen

Se propone la reacción de 3 H-metilén carbeno ( 3 H-:CH 2 ) con la cadena polipeptídica para el análisis de transiciones conformacionales, estimación experimental del área accesible al solvente (ASA) y, en particular, para inferir características estructurales de b-lactamasa de B. licheniformis (BL-bL).

3 H-:CH 2 reacciona indiscriminadamente con grupos pertenecientes a su entorno molecular inmediato, rindiendo productos metilados estables. 3 H-:CH 2 se genera a partir de la fotólisis de un precursor estable, 3 H-DZN, que es un gas de tamaño comparable al del agua, por lo que sondearía la misma superficie que las moléculas del solvente.

En la evaluación de la transición conformacional N®D de BL-bL, el aumento observado en el nivel de marcación, se interpreta a partir del incremento de ASA que ocurriría concomitantemente con el desplegado de la cadena polipeptídica. En la transición N®I, el incremento en el nivel de marcación se debería al acceso facilitado de 3 H-DZN al interior proteico debido al menor empaquetamiento de la proteína. En la transición I®D, el pequeño descenso producido en la incorporación de radiactividad, sería consecuencia del balance entre dos fenómenos opuestos: la partición preferencial del reactivo por zonas hidrofóbicas de la proteína que están presentes en el estado I, y el aumento de ASA que ocurre con la desnaturalización.

A nivel peptídico, en general se observó un incremento en el nivel de marcación en el estado D respecto de N, y se confirma el fenómeno de marcación general con 3 H-DZN modulado por las características del microentorno. En particular, se obtuvo información estructural sobre dominios de BL-bL y sobre una región interdominio asociada al sitio activo.

MARCADORES INMUNOLOGICOS DE AUTOINMUNIDAD EN DISTINTAS FORMAS CLINICAS DE DIABETES MELLITUS

Autor: Silvina Noemí VALDEZ

Director: Dr. Edgardo POSKUS

Area de investigación: Inmunología

Lugar de trabajo: Cátedra de Inmunología - IDEHU - F. F. y B.

Resumen

Los objetivos del trabajo de Tesis fueron 1) determinar el perfil diferencial de la respuesta inmune humoral en variantes de Diabetes Mellitus (DM) y 2) desarrollar alternativas analíticas optimizadas para su determinación sistemática. Los marcadores determinados en los pacientes diabéticos fueron: ICA, IAA/PAA, GADA e IA-2A.

Los resultados obtenidos en pacientes con DM tipo 1 mostraron que la determinación combinada de GADA e IA-2A es de elección para el screening de grupos de riesgo, para predecir y prevenir la enfermedad. Se implementó y optimizó el ensayo radiométrico (RBA) combinado GADA/IA-2A, el cual presentó el mayor porcentaje de positividad (87%) dentro del grupo de pacientes estudiados.

Los resultados obtenidos en pacientes diabéticos diagnosticados en edad adulta mostraron que la determinación combinada de GADA e IAA/PAA es apropiada para detectar las formas asociadas a autoinmunidad y predecir el requerimiento insulínico. Se diseñó un RBA para PAA usando [ 35 S]proinsulina producida por un lisado de reticulocitos de conejo. El trazador se sometió a la reducción de los puentes disulfuro, permitiéndose su replegamiento in vitro, y se purificó por HPLC. El comportamiento inmunoquímico de [ 35 S]proinsulina se comparó con el del trazador clásico [ 125 I]insulina, obteniéndose una buena correlación. Luego se desarrolló el RBA combinado GADA/PAA, el cual fue aplicado a 98 sueros de pacientes diabéticos adultos, 18% de los cuales resultaron positivos. De estos pacientes positivos, 89% progresaron a dependencia insulínica, sugiriendo que dicho ensayo puede constituirse en un análisis predictivo.

EVALUACION COMPARATIVA DE LEGISLACIONES PARA FITOTERAPICOS

Autor: Carina VETYE

Director: Dr. Alberto GURNI

Area de investigación: Farmacobotánica y Farmacognosia

Lugar de trabajo: Cátedra de Farmacobotánica - F. F. y B.

Resumen

En el mundo occidental las leyes nacionales que reglamentan a los medicamentos consideraron aquéllos con principios activos sintéticos. En general no incluyeron – o sólo lo hicieron al margen – reglamentaciones para fitoterápicos, que en muchos países quedaron sin legislar constituyendo “borderline products”. Como consecuencia del auge internacional del uso de fitoterápicos observado en los últimos 15 años, con volúmenes de venta importantes, aparición de productos de calidad dudosa y aumento de efectos indeseados e interacciones, surgió la necesidad de reglamentar en forma más eficaz a las plantas medicinales y sus preparaciones. Primeramente se decidió cómo clasificar a los fitoterápicos, ya que según el país en su mayoría eran – o aún son – ofrecidos como alimentos, suplementos dietarios o medicamentos .

En esta Tesis se presentaron, compararon y evaluaron, en cuanto a ventajas y riesgos, las legislaciones nacionales vigentes o proyectadas para fitoterápicos en los Estados Unidos de América, Canadá, la Unión Europea (Alemania, Francia, el Reino Unido, Irlanda, Bélgica, Holanda, España e Italia), la República Popular China (por el aumento internacional del uso de plantas de la medicina tradicional china) y la República Argentina. Se incluyeron también las propuestas para plantas medicinales y preparaciones vegetales de la Organización Mundial de la Salud y se elaboró una propuesta propia.

LA PRECONCENTRACION EN LINEA PARA EL ANALISIS DE BIOPOLIMEROS. APLICACION AL ANALISIS DE PEPTIDOS SINTETICOS

Autor: Nora Matilde VIZIOLI

Director: Dra. Clyde CARDUCCI

Area de investigación: Química Analítica

Lugar de trabajo: Cátedra de Química Analítica - F. F. y B.

Resumen

En los últimos años, una gran atención ha sido dirigida al desarrollo y la aplicación de la preconcentración y de las microreacciones en línea con la electroforesis capilar (CE) empleando adsorbentes selectivos y no selectivos. El principio básico de estas técnicas involucra la interacción molecular de un ligando, apropiadamente unido a un soporte sólido, con un analito de interés presente en una matriz simple o compleja.

En este trabajo, concentradores de analitos empacados con partículas de fase reversa C-18 fueron acoplados en línea con CE para el control de pureza de péptidos sintéticos. Se lograron aumentos de 100 a 330 veces en la sensibilidad de detección con un remarcable mejoramiento en la selectividad y la resolución. La preconcentración en línea con CE demostró ser más ventajosa y conveniente que la CE zonal para la determinación del perfil de impurezas de los péptidos ensayados.

Con el fin de mejorar la performance de los concentradores, especialmente con relación a la preparación de las microcolumnas, se propuso un polímero macroporoso monolítico como soporte sólido. La síntesis de este material se llevó a cabo por polimerización de ésteres de metacrilato con radiación gamma sobre una fuente de 60 Co. Los grupos epóxido fueron modificados químicamente para ser usados en la retención de péptidos por afinidad a iones cobre inmovilizados en el soporte. Estos diseños sin fritas fueron simples de preparar y reproducibles en su comportamiento. El polímero macroporoso, como soporte sólido, es altamente recomendable para la preconcentración en línea con CE, brindando la posibilidad de unir covalentemente un amplio rango de grupos funcionales para su aplicación en numerosos campos de las biociencias, desde el diagnóstico médico a la proteómica.

PERFIL BIOQUIMICO NUTRICIONAL Y RIESGO QUIRURGICO: INFLUENCIA DEL ESTADO NUTRICIONAL EN LAS COMPLICACIONES QUIRURGICAS.

Autor: Liliana Beatriz ZAGO

Director: Dra. María Esther RIO de GOMEZ DEL RIO

Area de investigación: Nutrición

Lugar de trabajo: Cátedra de Nutrición - F. F. y B.

Resumen

Se ha demostrado la influencia del estado nutricional del paciente quirúrgico en la evolución postoperatoria, en situaciones de alto deterioro energético-proteico y grado de severidad clínica. Esta tesis tuvo por objetivo: 1) establecer la influencia del estado nutricional sobre la aparición de complicaciones postoperatorias en pacientes de bajo riesgo y sin aparente compromiso nutricional; 2) seleccionar indicadores bioquímicos de estado nutricional capaces de predecirlas y, 3) seleccionar los puntos de corte más adecuados a tal uso. Se estudiaron 100 pacientes: 41 de hernia y 59 de litiasis vesicular; 51 mujeres y 49 varones, entre 18 y 83 años de edad. Se determinaron 23 indicadores de estado nutricional respecto de proteinas, vitaminas y minerales sobre muestras obtenidas dentro de las 24 hs. previas a la intervención quirúrgica y se registró la evolución postoperatoria: 26 pacientes presentaron complicaciones, 16 de ellos de la herida. Se seleccionaron cinco indicadores, tres correspondientes a proteínas y los otros dos a vitamina A y hierro, y los puntos de corte más adecuados para predecir complicaciones, se establecieron sobre la base de la sensibilidad, especificidad, valor predictivo, riesgo relativo y significación estadística. La fibronectina sérica se identificó como un marcador específico para complicaciones de la herida.

ESTUDIOS MOLECULARES PARA DETERMINAR LA FUNCION DE MEK1 (QUINASA MEIOTICA 1) DURANTE LA MEIOSIS EN LEVADURAS

Autor: Teresa ZUNGRI

Director: Dra. María Luján TOMARO

Codirector: Dra. Nancy HOLLINGSWORTH

Area de investigación: Química Biológica

Lugar de trabajo: Dpto. de Bioquímica y Biología Celular - Univ. del Estado de New York - Stony Brook y Cátedra de Química Biológica Vegetal - F. F. y B.

Resumen

Durante la meiosis en levaduras el ensamblado adecuado de los elementos axiales del complejo sináptico estabiliza los intermediarios de recombinación y asegura la correcta segregación de los cromosomas homólogos. El gen MEK1 codifica una proteína con homología de quinasas de serinas/treoninas, involucrada en la biogénesis de los elementos axiales. En este trabajo de Tesis se demuestra que Mek1p es una quinasa funcional in vitro y su actividad catalítica es parte esencial de su función in vivo. El elemento axial Red1p se fosforila dependiendo de la presencia de MEK1 . La interacción entre los elementos axiales Hop1p y Red1p se encuentra favorecida por la presencia de Mek1p garantizando la formación de un complejo sináptico funcional para la adecuada segregación cromosomal durante la primera división meiótica. La mutación de la Treonina 327, ubicada en el bucle de activación, altera la función biológica de la enzima sugiriendo que, de forma similar a otras quinasas, la actividad de Mek1p se encuentra regulada. En la búsqueda de proteínas que interactuaran con Mek1p se identificó un nuevo componente de la maquinaria de recombinación meiótica, MMS4 . Se propone que MMS4 actúa en la reparación de estructuras de ADN con segmentos 3' desapareados que pudieran originarse por una replicación extendida en el modelo de SDSA de la recombinación meiótica.